質粒制備服務

質粒制備QC項目詳解

金斯瑞質粒制備系列服務默認提供7項以上QC檢測，旨在為客戶提供高質量，高標準的質粒。常規QC項目包括限制性內切酶酶切分析，殘留RNA檢測，殘留DNA檢測，內毒素分析，免費目標基因序列測序，同時金斯瑞還提供精準內毒素含量測定，RNA消除等附加QC服務項目，靈活的選擇滿足客戶的定制化需求。

QC 項目	參考狀態	測定方法
超螺旋程度	高級別質粒≥ 90%	瓊脂糖凝膠電泳密度測定
內毒素測定	高級別質粒≤ 0.005 EU/μg DNA	TAL 分析
插入序列全長測序	序列準確	Sanger 測序
生物負載測定	72小時無生長	生物負載實驗
限制性內切酶分析	與預期大小一致	酶切后凝膠電泳分析
外觀	透明，無明顯顆粒	視覺觀測
A260/280	1.8-2.0	Nanodrop UV值測定
殘留RNA	凝膠電泳不可見	瓊脂糖凝膠電泳密度掃描
基因組DNA污染	基因組DNA＜質粒條帶的15%	GIS灰度分析法
全長測序服務	序列準確	Sanger 測序
Animal free RNA去除	無特定標準值	/
濃度	干粉、液體（默認1mg/mL*，可根據需求調整濃度）	UV測定

注：*不同儀器的濃度讀數可能在-5%～+15%之間變化。

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分子生物學服務

常規問題解答

1. 什么是內毒素，為什么我們要關注質粒中的內毒素殘留量？金斯瑞提供了哪些不同的選擇？

答：內毒素是存在于細菌如大腸桿菌外膜中的脂多糖或脂聚糖，可以固定膜的完整性和保護細菌本身免受某些壓力，維持細菌結構的穩定性。但若制備的質粒中內毒素殘留過高，會使其轉染細胞的效率降低，同時還可能造成動物或人的免疫反應進而影響基因免疫療法的實驗結果。
2. 什么是“控制內毒素流程”和“內毒素去除” ？

答： “控制內毒素流程”是指嚴格控制在整個實驗過程中使用的試劑，材料使其不含內毒素，但不保證細菌裂解過程中細菌本身釋放的內毒素。“內毒素去除”是指質粒制備過程中的一個獨立步驟，該步驟使用化學試劑去除質粒制備過程中產生的內毒素。
3. 金斯瑞制備的質粒其內毒素殘留量是多少？

答：金斯瑞提供3種不同的質粒制備服務，不同服務內毒素含量水平也不相同。分子生物學質粒制備未使用內毒素控制流程，但嚴格控制質粒制備操作手法，能盡可能的減少內毒素的產生。轉染級質粒制備可確保內毒素水平≤0.01 EU/μg，代表了當今市場上質粒制備較嚴格的內毒素質量標準。我們的高通量質粒制備服務使用內毒素控制流程，能確保制備的質粒內毒素水平<0.1 EU/μg，滿足細胞轉染實驗要求。
4. 什么是“Animal-free 培養基”？

答：Animal-free培養基是不含任何動物來源成份的培養基。金斯瑞質粒制備服務均使用Animal-free培養基。
5. 什么是“Animal-free質粒制備流程”？

答：金斯瑞Animal-free 質粒制備流程中不僅使用Animal-free培養基，同時在質粒制備中不使用牛胰腺 RNase而是使用重組RNase，能確保制備的質粒中沒有牛血清白蛋白成分殘留。使用Animal-free質粒制備流程制備質粒對避免臨床應用和動物研究的安全風險至關重要。
6. 為什么質粒的超螺旋占比很重要？

答：多項研究表明，質粒中超螺旋狀態的占比是眾多下游實驗成功的關鍵。例如，超螺旋可以強烈影響細胞轉染效率和影響DNA治療中副作用的產生概率。超螺旋占比已被認定為預測質粒性能的一項重要指標。