選擇指導(dǎo)

*Anti-scFv antibody Cocktail (Min X) 對(duì)人IgG, 小鼠IgG, 山羊IgG和兔IgG無(wú)交叉反應(yīng)。

應(yīng)用案例

• 流式細(xì)胞術(shù)表征CAR-T細(xì)胞

  金斯瑞的Anti-scFv抗體對(duì)基于scFv的CAR-T細(xì)胞表現(xiàn)出超高的特異性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示不同稀釋比例的Anti-scFv抗體均能準(zhǔn)確檢測(cè)CAR-T細(xì)胞的陽(yáng)性率，且該抗體對(duì)未被編輯的T細(xì)胞表現(xiàn)出極低的非特異性結(jié)合，因此可用于CAR-T細(xì)胞的表征。

  

  圖2：Anti-scFv抗體表征基于scFv的CAR-T細(xì)胞

  使用不同稀釋比例（1：50-1：500）的MonoRab? Rabbit Anti-scFv Cocktail [iFluor 647] (GenScript, A02288) 檢測(cè)相同的CAR-T細(xì)胞。MonoRab? Rabbit IgG Control [iFluor 647] (Whole Molecule), mAb (GenScript, A02026)對(duì)CAR-T細(xì)胞的染色以及A02288對(duì)na?ve T細(xì)胞的染色作為陰性對(duì)照。

• 基于scFv的CAR-T細(xì)胞表征工具比較

  流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示Anti-scFv抗體相比于Protein L和Anti-Fab抗體具有更優(yōu)的細(xì)胞分群效果和更高的檢出率。

  

  圖3：基于scFv的CAR-T細(xì)胞表征工具比較

  使用相同濃度的MonoRab? Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282) 、FITC-Labeled Recombinant Protein L 和 Alexa Fluor? 647 AffiniPure Goat Anti-Human IgG, F(ab’)2 檢測(cè)相同數(shù)量和結(jié)構(gòu)的CAR-T細(xì)胞。其中，Anti-scFv抗體的熒光信號(hào)由Alexa Fluor? 488-Labeled Goat Anti-Rabbit IgG提供。

• ELISA檢測(cè)scFv與靶蛋白的結(jié)合

  Anti-scFv抗體可用于檢測(cè)人源化scFv、鼠源scFv和雙特異性抗體對(duì)其靶蛋白的結(jié)合能力。

  

  圖4：Anti-scFv抗體檢測(cè)scFv/雙特異性抗體對(duì)其靶抗原的結(jié)合曲線

  抗原包被濃度為1 μg/mL；scFv濃度從1.37 ng/mL到1000 ng/mL；A02282濃度為1 μg/mL；酶標(biāo)二抗使用Mouse Anti-Rabbit IgG Fc Antibody (14H9H10) [HRP], mAb(GenScript, A01856)，稀釋比例為1：20000。靶點(diǎn)及scFv信息如下：
  Humanized scFv#1:anti-VEGF scFv; Antigen#1:VEGF; Mouse scFv#2: anti-BCMA scFv; Antigen#2: BCMA; Bispecific Antibody#3: anti-CD19×anti-CD3，BiTE; Antigen#3: CD3.

• 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)scFv與靶細(xì)胞的結(jié)合

  流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示Anti-scFv抗體對(duì)結(jié)合scFv的細(xì)胞表現(xiàn)出較高的特異性信號(hào)，對(duì)未結(jié)合scFv的細(xì)胞表現(xiàn)出較低的非特異性信號(hào)，因此可用于檢測(cè)scFv對(duì)其靶細(xì)胞的結(jié)合能力。

  

  圖5：Anti-scFv抗體檢測(cè)scFv對(duì)其靶細(xì)胞的結(jié)合活性

  使用MonoRab? Rabbit Anti-scFv Cocktail [FITC](GenScript, A02284)分析anti-CD20抗體對(duì)Raji細(xì)胞的結(jié)合能力。其中藍(lán)色實(shí)線代表未染色細(xì)胞，紅色實(shí)線代表僅加入A02284的細(xì)胞，綠色實(shí)線代表加入anti-CD20 scFv和A02284的細(xì)胞。

產(chǎn)品性能

• 高適用性

  ELISA結(jié)果顯示MonoRab? Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282) 可特異性識(shí)別不同來(lái)源、不同連接順序（VH-VL或VL-VH）、不同linker的scFv以及不同形式的基于scFv的雙特異性抗體，如BiTE, IgG(H)-(scFv)2, (scFv)2-(H)IgG, scFv-Fab-Fc等。

  

  圖6：Anti-scFv抗體對(duì)不同序列scFv和雙特異性抗體的結(jié)合曲線

  不同來(lái)源、不同連接順序（VH-VL或VL-VH）、不同linker的scFv或不同形式的雙特異性抗體以1 μg/mL的濃度包被在酶標(biāo)板上；A02282濃度從0.017 ng/mL到1000 ng/mL；酶標(biāo)二抗使用Mouse Anti-Rabbit IgG Fc Antibody (14H9H10) [HRP], mAb(GenScript, A01856)，稀釋比例為1：20000。

• 高親和力

  生物膜干涉技術(shù)（BLI）結(jié)果顯示MonoRab? Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282)對(duì)不同來(lái)源、不同連接順序（VH-VL或VL-VH）、不同linker的scFv以及不同形式的基于scFv的雙特異性抗體具有較高的親和力。

  

  圖7：BLI檢測(cè)Anti-scFv抗體對(duì)不同序列scFv和雙特異性抗體的親和力

• 高靈敏度

  WB結(jié)果顯示MonoRab? Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282)對(duì)不同來(lái)源scFv及雙特異性抗體BiTE均具有較高的靈敏度。

  

  圖8：Western Blot檢測(cè)Anti-scFv抗體對(duì)不同來(lái)源scFv和雙特異性抗體的靈敏度

  MonoRab? Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282)按1：5000稀釋，4℃孵育過(guò)夜；二抗采用Mouse Anti-Rabbit IgG Fc Antibody (14H9H10)[HRP], mAb (GenScript, A01856)，1：20000稀釋，室溫孵育1h。

• 高批次穩(wěn)定性

  三批次MonoRab? Rabbit Anti-scFv Cocktail (GenScript, A02282)對(duì)scFv表現(xiàn)出一致的結(jié)合曲線，各濃度點(diǎn)CV<10%。

  

  圖9：ELISA檢測(cè)MonoRab? Rabbit Anti-scFv Cocktail的批次穩(wěn)定性

  scFv包被濃度為1 μg/mL；MonoRab? Rabbit Anti-scFv Cocktail（GenScript, A02282）從111 ng/mL開始進(jìn)行3倍梯度稀釋；檢測(cè)抗體使用Mouse Anti-Rabbit IgG Fc Antibody (14H9H10) [HRP], mAb (GenScript, A01856)，稀釋比例為1：20000。

• 非抗原結(jié)合阻斷

  競(jìng)爭(zhēng)ELISA結(jié)果顯示Anti-scFv抗體在與scFv的結(jié)合后并不影響scFv對(duì)其靶抗原的結(jié)合。

  

  圖10：Anti-scFv抗體與scFv或雙特異性抗體的結(jié)合并不影響scFv或雙特異性抗體對(duì)其靶抗原的結(jié)合活性

  Antigen #1、Antigen #2和Antigen #3包板后，將A02282與Humanized scFv #1、Mouse scFv #2或Bispecific antibody #3混合后加入孔板中反應(yīng)，隨著A02282濃度的提高，Humanized scFv #1、Mouse scFv #2或Bispecific antibody #3對(duì)其靶抗原結(jié)合能力并沒(méi)有顯著變化，相比于未加入A02282的變化幅度在80%-120%之間，表明A02282對(duì)scFv結(jié)合其相應(yīng)抗原的影響較小。靶點(diǎn)及scFv信息如下：
  Humanized scFv#1:anti-VEGF scFv; Antigen#1:VEGF; Mouse scFv#2: anti-BCMA scFv; Antigen#2: BCMA; Bispecific Antibody#3: anti-CD19×anti-CD3, BiTE; Antigen#3: CD3.

產(chǎn)品列表

相關(guān)資料

MonoRab?抗scFv納米抗體

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相關(guān)產(chǎn)品

Anti-VHH抗體